SDS凝胶配制试剂盒

发布时间：2024-11-15 热度：431

产品简介：

本产品包括SDS-PAGE凝胶制备所需的全套试剂，只需自备蒸馏水，即可方便、快捷地制备高质量各种浓度的变性及非变性PAGE凝胶。

注：本产品所提供的APS(过硫酸铵）为固体粉末，使用前加入5ml双蒸水溶解即配制成10%APS溶液将溶液分装后至于-20℃保存，通常半年内有效，溶液在使用中可放置4℃保存两周。

保存条件：

SDS-PAGE凝胶试剂盒保存于2-8℃，其中过硫酸铵溶解后分装保存于-20℃。

操作流程：

根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE分离胶配制浓度，最佳胶浓度请参考附表1：

步骤1：配制分离胶（各试剂使用量请参考附表2）

1. 参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具；

2. 将不同体积的30%Acr-Bis（29:1）,分离胶缓冲液和双蒸水在小烧杯或试管中混合；

3. 加入10%APS和TEMED,轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡；

4. 在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5cm或距梳齿约0.5cm即可），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1.5cm的水层，封闭，直至溢出模具，使凝胶表面保持平整；

5. 静置30-60min，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，表面凝胶已聚合。                            

步骤2：配制浓缩胶（各试剂使用量请参考附表3）

1. 去除覆盖在分离胶上的水层；

2. 将不同体积的30%ACr-Bis（29:1）、浓缩胶缓冲液和双蒸水在一个小烧杯或试管中混合；

3. 加入10%过硫酸铵和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡；

4. 将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端；

5. 将梳子插入凝胶内，避免产生气泡；

6. 静置20-40分钟，等待浓缩胶聚合；

7. 待凝胶聚合后，小心拔出梳子，以免破坏加样孔；

8. 进行常规电泳操作。

注意事项：

1.10%APS配制后分装-20℃保存。APS溶液不稳定，应尽量减少室温存放时间，每次取用后立即放回冰箱，以防失效，若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20℃保存的10%APS；

2. PAGE凝胶的凝聚速度与温度以及APS、TEMED的用量密切相关；在其他条件不变的情况下，可通过改变APS及TEMED的用量，控制PAGE凝胶的聚合速度，凝胶聚合过快不利于操作；附表中的APS及TEMED量可供参考，应根据实际操作情况做适当的调整；

3. 将10%SDS置于室温下，使其完全溶解后方可使用；

4. 在凝胶配制过程中，尤其在液体混匀步骤，应尽量避免气泡产生；

5. 在分离胶上层加蒸馏水时要小心操作，加水时速度不能太快；

6. 丙烯酰胺具有神经性毒性，操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套；

7. 本产品仅用于科研，不能用于人体实验或人体治疗。