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免疫荧光染色的操作步骤

免疫荧光染色的详细步骤及其注意事项:(1)选取一抗时要来源于两种不同的动物,我用的是来源于rabbit和rat的抗体,二抗则是不同荧光信号标记的,我用的是donkey anti-rabbit-FITC(绿)和donkey anti-rat-Tex-Red(红)。..

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免疫荧光染色的操作步骤

发布时间:2017-07-20 热度:250

免疫荧光染色的详细步骤及其注意事项:

(1)选取一抗时要来源于两种不同的动物,我用的是来源于rabbit和rat的抗体,二抗则是不同荧光信号标记的,我用的是donkey anti-rabbit-FITC(绿)和donkey anti-rat-Tex-Red(红)。

(2)做法是两种一抗同时孵育,然后两种二抗同时孵育。抗体浓度、孵育时间要仔细摸索,感觉一抗4度孵育过夜比较好,背景比较清晰。

(3)阳性对照用的是阳性组织切片,阴性对照则分别是家兔和大鼠的IgG,荧光标记物对照是PBS+荧光标记物。

(4)封闭血清与二抗来源动物一致,用的是10%的正常donkey血清。

(5)其余步骤同一般免疫荧光单标操作。



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