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免疫荧光双标技术染色方法

免疫荧光双标技术染色是常规染色服务中比较常见的一种,今天我们来介绍一下免疫荧光染色注意事项..

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免疫荧光双标技术染色方法

发布时间:2017-07-21 热度:373

免疫荧光双标技术染色是常规染色服务中比较常见的一种,今天我们来介绍一下免疫荧光染色注意事项:

(1) 陕西依科生物提醒:由于荧光容易淬灭,一般仅能维持几个小时,因此,荧光二抗应避光保存,即从加入荧光二抗以后的步骤中都要尽量避光操作。封片后应尽早照相,目前有市售的荧光增强剂,可使荧光在4℃保存1-2周仍不淬灭。

(2) 免疫荧光双标技术染色常用的荧光素有以下几种,绿色荧光:FITC、 Alexa Fluor 488和GFP;红色荧光:TRITC、Cy3、Alexa Fluor 568&594和MitoTrackerRed;蓝色荧光:Hoechst、DAPI;黄色荧光:YFP、Fluo-3和Rhoda-minel23等。

(3)陕西依科生物提醒,不同的荧光素激发的波长不同,因此,选用滤光片时要注意。一般紫外线的激发波长为334-365nm,蓝光的激发波长为435-490nm,绿光的激发波长为546nm左右。

(4) 荧光显微镜应提前至少15min打开汞灯预热。关闭30min后方可再开启。

(5)免疫荧光双标技术染色的组织要求很高,载玻片及盖玻片要干净无杂质。进行荧光染色时,需注意染液的pH、浓度和染色温度,还要避免对荧光有熄灭作用的物质的接触。组织和细胞也有自发荧光,如红细胞中的血红蛋白呈红色荧光,维生素A呈绿色自发性荧光等。



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