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GeneHero™ CRISPR-Cas9 产品与服务

产品介绍GeneCopoeia GeneHero™CRISPR-Cas9产品和服务为您的基因组编辑需求提供了完整、强大的解决方案。 产品和服务包括:用于人、小鼠和大鼠的全基因组 sgRNA 克隆。 在我们的数据库中可搜索超过45,000个经过序列验证的、可用CRISPR 技术介导敲除的人、小鼠和大鼠基因。HDR 供体克隆载体和定制的 HDR 供体克隆构建。可用..

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GeneHero™ CRISPR-Cas9 产品与服务

发布时间:2024-02-10 热度:28

产品介绍

GeneCopoeia GeneHero™CRISPR-Cas9产品和服务为您的基因组编辑需求提供了完整、强大的解决方案。 产品和服务包括:

用于人、小鼠和大鼠的全基因组 sgRNA 克隆。 在我们的数据库中可搜索超过45,000个经过序列验证的、可用CRISPR 技术介导敲除的人、小鼠和大鼠基因。

HDR 供体克隆载体和定制的 HDR 供体克隆构建。可用于通过同源重组介导的 CRISPR 基因组编辑应用。

Cas9稳定细胞系。预制 Cas9 稳定表达细胞系特别适用于sgRNA文库筛选和其他高通量 CRISPR-Cas9 应用。

Safe Harbor 基因敲入试剂盒及 ORF 敲入克隆。使用我们的人类 AAVS1 和小鼠 ROSA26Safe Harbor 基因敲入试剂盒可以轻松实现几乎任何DNA片段的成功敲入。人类及小鼠各有超过20,000条经过序列验证的ORF可用于转入基因的供体克隆设计。

IndelCheck™ 插入缺失检测体系。IndelCheck™ CRISPR/TALEN 插入缺失检测体系是一套设计用于验证基因组编辑工具功能或检测编辑阳性细胞的完整体系,包括靶点 PCR 试剂盒、T7 核酸内切酶 I 检测试剂盒以及靶点 PCR 克隆试剂盒。另外,靶位点特异性PCR引物亦可选择。

sgRNA 文库。我们提供7款预制的、通路特异性的 sgRNA 文库,每款都有慢病毒颗粒、转染级质粒 DNA 以及菌种等三种形式可供选择。客户也可以自行定制满足实验需求的 sgRNA 文库。

转基因小鼠服务。GeneCopeia 提供原核显微注射法生成的、CRISPR介导的基因组修饰小鼠。基因组修饰的类型包括组成型基因敲除、条件性基因敲除、组成型基因敲入、人源化及转基因等。

VividFISH™染色体FISH计数探针。FISH是帮助您鉴定靶基因拷贝数的强大工具。在进行基因组编辑实验前使用VividFISH™探针来鉴定目的染色体拷贝数,可对后续筛选目的修饰阳性克隆有所帮助。

优势

RNA导向的基因组DNA识别,无需考虑DNA甲基化

较ZFN和TALEN,有相同或更高的基因编辑效率

可同时编辑多个基因(多重靶向编辑)

设计简单快速,无需重复构建核酸内切酶

SgRNA克隆

GeneHero™ sgRNA设计与克隆定制服务

GeneCopoeia为客户感兴趣的基因提供sgRNA(single-guide RNA)设计与克隆定制服务。sgRNA克隆表达一个单链的融合sgRNA(由crRNA和tracrRNA融合而成)。当Cas9核酸酶存在时,sgRNA能识别靶标DNA序列并引导Cas9核酸酶剪切靶标位点,形成DNA双链断裂(DSBs),进而实现基因敲除、敲入及突变等基因组编辑。多个sgRNA克隆与一个Cas9克隆共转染可同时在基因组中编辑多个位点,使实验设计更高效、更灵活。

Cas9表达克隆

GeneHero™ Cas9 核酸酶及 D10A 切口酶表达克隆

Cas9核酸酶克隆表达按照人类密码子优化过的Cas9核酸酶基因。Cas9切口酶克隆表达一个Cas9 D10A 切口酶基因。该切口酶是一个Cas9突变体,第10位氨基酸从野生型的天冬氨酸突变成了丙氨酸。

CRISPR-Cas9体系是由sgRNA和Cas9核酸酶构成的DNA靶向识别剪切复合体。sgRNA识别一段20bp、3端紧接着5′-N-G-G-3′ PAM位点的DNA靶序列,Cas9核酸酶在该靶序列上生成DNA双链断裂(DSB)。DNA双链断裂(DSB)会被细胞的非同源末端连接(NHEJ)或同源重组(HR)机制修复。NHEJ机制容易在修复的断裂位点引入插入/缺失突变,造成阅读框移码而产生基因敲除的效果。同源重组(HR)需要细胞内同时存在一段带有靶点同源序列的供体DNA作为修复模板,我们可以通过对供体DNA进行设计,在众多实验体系中实现基因敲除或者敲入突变修饰、报告基因等等一系列基因组修饰。

Cas9 D10A切口酶跟野生型的Cas9一样,也使用sgRNA识别靶序列。但Cas9 D10A切口酶在靶序列上生成的是单链切口而非双链断裂。单链切口通常会由NHEJ和HR以外的机制完美地修复。但通过设计一对定向正确的sgRNA分别识别靶点两侧的DNA双链,我们可以诱导Cas9 D10A分别在靶点两侧的DNA双链上各生成一个单链切口,构成一个双链断裂(DSB),进而诱导NHEJ或HR修复机制。这种双切口策略常被用在要求低脱靶率的实验设计中。



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