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细胞名称
NCM460 人正常结肠上皮细胞
货号
U80258
种属
人
细胞来源
从ATCC/中科院/协和医院等地引进
生长特性
贴壁 上皮样
培养条件
培养基：DMEM/F-12+20%FBS（推荐使用UBI的特级胎牛血清（U11-059A）
温度：37℃ 气相：95%空气，5%二氧化碳
传代
1.用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒，将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲，.然后置于无菌操作台，打开瓶口，将其中的培养液去掉，再往其中加入5-6mL新鲜培养基(以T25培养瓶为例)并置于细胞培养箱中培养，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代，一般2到3天换一次液；
2.待细胞长满瓶底面积80%-90%，需要对其进行传代，传代比例为1:3到1:6；
3传代步骤：将0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°预热，倒掉培养瓶中的培养基，往培养瓶中加入3-5 ml PBS，轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶，置于37°孵育消化（第一次消化需时常取出置于显微镜下观察，以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为*佳消化时间，记录*佳消化时间，以便于下次消化），消化好后加入3ml完全培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之完全脱落，然后收集细胞悬液，1200rpm离心3min，弃上清，加入完全培养基重悬细胞，进行传代。
保存
冻存条件：80%完全培养基+10%FBS+10%DMSO
(备注：建议使用UBI的Cell Freezing Medium无血清冻存液（U80-025C），用4度保存的冷冻液直接重悬细胞，不能预热后使用。)
保存条件：液氮存储
供应限制
经供研究之用
常见问题及解决方案
1.培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。
2.收到细胞后尽快更换为含 10%血清的新鲜培养基，如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基，请在原瓶培养基中额外添加 10%的血清（原瓶培养基的继续使用时间*长不宜超过 72 小时）
3.细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。1-2小时后观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留8-10ml培养液培养观察，细胞生长至汇合度80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。
