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细胞名称
FHC 正常人结肠上皮细胞
货号
U80256
种属
人
细胞来源
从ATCC/中科院/协和医院等地引进
生长特性
贴壁(上皮样)
培养条件
he base medium for this cell line is DMEM:F12 Medium (ATCC 30-2006).To make the complete growth medium, add the following components to the base medium:extra 10 mM HEPES (for a final conc. of 25 mM)10 ng/ml cholera toxin0.005 mg/ml insulin0.005 mg/ml transferrin100 ng/ml hydrocortisone20 ng/mL human recombinant EGF (Thermo Fisher PHG0311)Fetal Bovine Serum, 10% final conc (ATCC 30-2020),推荐使用UBI的特级胎牛血清(U11-059A),温度:37℃,气相:95%空气,5%二氧化碳
传代
1,用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒,将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲,.然后置于无菌操作台,打开瓶口,将其中的培养液去掉,再往其中加入5-6mL新鲜培养基(以T25培养瓶为例)并置于细胞培养箱中培养,根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代.
2,待细胞长满瓶底面积80%-90%,需要对其进行传代,传代比例为1:3;
3,传代步骤:将0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°预热,倒掉培养瓶中的培养基,往培养瓶中加入3-5 ml PBS,轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶,置于37°孵育消化(第一次消化需时常取出置于显微镜下观察,以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为*佳消化时间,记录*佳消化时间,以便于下次消化),消化好后加入3ml完全培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞,使之完全脱落,然后收集细胞悬液,1200rpm离心3min,弃上清,加入完全培养基重悬细胞,进行传代。
4,2-3天换液一次
保存
冻存液:无血清冻存液,温度:液氮
(备注:建议使用UBI的Cell Freezing Medium无血清冻存液(U80-025C),用4度保存的冷冻液直接重悬细胞,不能预热后使用。)
保存条件:液氮存储
供应限制
经供研究之用
常见问题及解决方案
1.培养瓶有破裂,培养液有漏液:细胞极大可能会污染,所以我们会及时安排帮老师解决。
2.收到细胞后尽快更换为含 10%血清的新鲜培养基,如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基,请在原瓶培养基中额外添加 10%的血清(原瓶培养基的继续使用时间*长不宜超过 72 小时)
3.细胞漂浮:培养瓶不开封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。1-2小时后观察,如细胞大部分又贴回瓶底,表明细胞活力正常,剩余漂浮的细胞可以去掉,留8-10ml培养液培养观察,细胞生长至汇合度80%,进行消化传代;如细胞还是不贴壁,将细胞离心收集转到新培养瓶,原培养瓶加部分培养液继续培养,中间注意观察,我们的技术人员会一直跟踪指导,直到问题解决。