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细胞名称
WEHI 164 鼠纤维肉瘤细胞系
货号
U30021
种属
小鼠
细胞来源
ATCC/中科院/协和医院等地引进
生长特性
贴壁
培养条件
培养基::90%RPM1640 +10%FBS,推荐使用UBI的特级胎牛血清(U11-059A)
温度:37℃ 气相:95%空气,5%二氧化碳
传代
1. 用 75%酒精喷洒整个培养瓶消毒,将其平躺置于培养箱中进行 1-3 小时的缓冲,然后置于无菌操作台,打开瓶口,将其中的培养液去掉,再往其中加入 5-6mL 新鲜 培养基并置于细胞培养箱中培养,根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换 液以及传代;
2. 待细胞长满瓶底面积 80%-90%,需要对其进行传代,第一次传代比例为 1:2;
3.传代步骤:将 0.25%含 EDTA 胰酶置于 37°预热,倒掉培养瓶中的培养基,往培养 瓶中加入 3-5 ml PBS,轻晃洗涤后弃去。往瓶中加 1-2 ml 预热好的胰酶,置于 37° 孵育消化(第一次消化需时常取出置于显微镜下观察,以显微镜下细胞触角回收变 圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为*佳消化时间,记录*佳消化时间,以便于下次消化), 消化好后加入 1ml 完全培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞,使之完 全脱落,然后收集细胞悬液,1200rpm 离心 3min,弃上清,加入完全培养基重悬细 胞,进行传代。
保存
冻存条件:90%完全培养基+10%DMSO
(备注:建议使用UBI的Cell Freezing Medium无血清冻存液(U80-025C),用4度保存的冷冻液直接重悬细胞,不能预热后使用。)
保存条件:液氮存储
供应限制
仅供研究之用
常见问题及解决方案
1.培养瓶有破裂,培养液有漏液:细胞极大可能会污染,所以我们会及时安排帮老师解决。
2.收到细胞后尽快更换为含 10%血清的新鲜培养基,如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基,请在原瓶培养基中额外添加 10%的血清(原瓶培养基的继续使用时间*长不宜超过 72 小时)
3.细胞漂浮:培养瓶不开封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。1-2小时后观察,如细胞大部分又贴回瓶底,表明细胞活力正常,剩余漂浮的细胞可以去掉,留8-10ml培养液培养观察,细胞生长至汇合度80%,进行消化传代;如细胞还是不贴壁,将细胞离心收集转到新培养瓶,原培养瓶加部分培养液继续培养,中间注意观察,我们的技术人员会一直跟踪指导,直到问题解决。