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实验标本要求

作者:admin  上传时间:2016/6/23 14:12:11  点击次数:3632次

 

实验标本要求

1:石蜡包埋标本

要求新鲜组织取好后马上固定,固定液为4%的甲醛 、多聚甲醛 。固定时间视组织大小而定,一般24小时足够。

固定液为组织体积的10倍以上。

组织需能在容器中

需要备注包埋面。观察 目的。




2:细胞爬片的固定

细胞片,去掉培养基。用PBS洗两次。

吸干PBS,用4%多聚甲醛固定15分钟。

倒掉固定液,用PBS泡着。

常温或4度运输。

也可以用70%酒精,丙酮固定细胞。

冰冻后的组织是否可以做石蜡包埋?

A、可以,但是对于形态有影响。特别是反复冻融的组织,影响非常大。肝,脑等组织会更敏感。

B、如果一定要用冰冻组织做石蜡包埋,将标本从冰箱中拿出不需解冻直接放入固定液中,固定液体积为组织的20倍。

C、冰冻组织做完石蜡包埋后,建议做HE染色,以确定组织效果。

 




3:组织固定多长时间

一般来讲24小时足够了。有些组织固定8小时也可以。

固定时间过长,例如几周、几月、甚至超过1年,对于形态染色,一般影响不是太大。但是对于免疫组化,影响会更大一些。所以不建议将标本长期放于固定液中。

固定用的容器

必须保证组织能在容器中自由流动。

对于肝、脑、肾等,不建议使用玻璃容器。特别是5ml的青霉素瓶。

除特别小的组织,不建议使用1.5ml离心管。

最好是使用带盖容器,防止固定液漏出。

标签要写清楚,整洁。注意,酒精会洗掉记号笔字迹。

 




4:骨组织的处理

骨组织经固定后一般需要脱钙处理。

硝酸脱钙优点:时间较短,一般2天左右。  缺点:HE染色组织形态不清晰,        且对于后期的免疫组化会有


EDTA脱钙优点:  HE染色组织形态对比清楚,对抗原保存较好。

  缺点:时间会较长,具体视标本大

             小定,一般为1.5个月左右




5:植物组织的包埋

一般使用FAA固定液,也可以4%多聚甲醛。

植物组织一般使用番红-固绿染色,主要染植物细胞的细胞壁。

对于枯萎组织、木质化较重组织(硬树枝)、成熟的种子等不易切片,细胞结构会不太完整。




6:其它材料

植入材料:备注材料主要特征,是否会被有机溶剂溶解。硬度。

脂肪:可以进行脱水包埋。石蜡切片染色,只能看到脂肪空泡。

不同种类组织放在一起时,可能会影响切片效果。




7:冰冻切片

组织尽可能新鲜。

固定后的组织可以做冰冻切片。如无特殊要求,建议新鲜组织经4%多聚甲醛固定后梯度蔗糖脱水再做冰冻切片。有利于形态保护。

组织中含荧光时,建议直接做冰冻切片。

未经固定直接做冰冻切片时,组织形态可能会不完整。

备注切片后是否需要固定。

油红O染色(观察脂肪):组织经固定,冰冻切片,油红O染色。水溶性封片剂封片,尽快观察。不能长期保存。

MASSON染色(观察胶原):组织经bouins固定液固定。普通固定也可以。

PAS糖原染色(观察糖原):普通固定。




电镜切片

组织取材时尽可能小,1mm*1mm截面。可以长一些。

取材部位要准确。

制片时如果需要定位(需看特定部位细胞),需指出。

组织需用2.5%戊二醛固定。4度保存。

如果拍照有倍数要求请备注。细胞一般拍几千倍,病毒等可以拍几万倍。

 

细胞标本电镜的处理

正常培养的细胞,收集细胞。

PBS洗一次,再次收集细胞。

去掉上清。缓慢加入2.5%戊二醛。尽量不要冲散细胞沉淀。

4度保存、运输。准备制片。

各种病理标本的保存

经固定后的组织,均可常温运输。不要冷冻。

石蜡包埋块、石蜡切片、组化片、HE片、masson片等均可常温保存、运输。防止物理损毁。

固定后的冰冻切片可以4度运输、保存。尽量不做长期保存。

未经固定的冰冻切片,-20保存。不建议保存。

油红O染色片、免疫荧光片4度保存。荧光需要避光。

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